Këto puffers mund të përdoren për aplikime biologjike në pH afërsisht neutrale
Tre vlerat pKa për acidin fosforik (nga Manuali i KDK-së i Kimisë dhe Fizikës) janë 2.16, 7.21 dhe 12.32. Fosfati monosodium dhe baza e tij konjugate, fosfat disodium, zakonisht përdoren për të gjeneruar bufer të vlerave pH rreth 7, për aplikimet biologjike, siç tregohet këtu.
Bërja e kësaj tampon është pak më e vështirë se sa duke e bërë tamponët TAE dhe TBE. Megjithatë, nuk është jashtëzakonisht e vështirë. Thjesht mesatare. Duhet të zgjasë rreth 10 minuta për të ngritur këtë tampon. Ja se si.
1. Vendosni mbi Buffer Properties
Para se të bëni një tampon, duhet së pari të dini se çfarë doni të doni, çfarë vëllimi duhet të bëni dhe çfarë është pH e dëshiruar. Shumica e mbulesave punojnë më së miri në përqendrime ndërmjet 0.1 M dhe 10 M. pH duhet të jetë brenda një njësie pH të bazës acid / konjugate pKa. Për thjeshtësi, llogaritja e mostrës do të jetë për 1 litër tampon.
2. Përcaktoni raportin e acidit në bazë
Përdorni ekuacionin Henderson-Hasselbalch (më poshtë) për të përcaktuar se çfarë raporti acid-bazë kërkohet për të bërë një tampon të pH-së së dëshiruar. Përdorni vlerën pKa më afër pH tuaj të dëshiruar dhe raporti do t'i referohet palës së konjuguar acid-bazë që korrespondon me atë pKa.
HH Ekuacioni: pH = pKa + log ([Baza] / [Acid])
Për një bufer të pH 6,9, [Base] / [Acid] = 0.4898
Zëvendësojeni për [Acid] dhe Zgjidheni për [Base]
Molariteti i dëshiruar i tamponës është shuma e [Acid] + [Base].
Për një tampon 1 M, [Baza] + [Acid] = 1 dhe [Baza] = 1 - [Acid]
Duke e zëvendësuar këtë në ekuacionin e raportit, nga hapi 2, ju merrni:
[Acid] = 0.6712 moles / L
Zgjidheni për [Acid]
Duke përdorur ekuacionin: [Baza] = 1 - [Acid], ju mund të llogarisni se:
[Baza] = 0.3288 moles / L
3. Përzieni Bazën Acid dhe Conjugate
Pasi të keni përdorur ekuacionin Henderson-Hasselbalch për të llogaritur se cili raport i acidit me bazën është i nevojshëm për tampon tuaj, përgatisni vetëm nën 1 litër zgjidhje duke përdorur sasi të sakta të fosfatit monosodium phosphate dhe dinatrium.
4. Kontrolloni pH
Përdorni një sondë pH për të konfirmuar se pH e saktë për tampon është arritur. Rregullo pak sa të jetë e nevojshme, duke përdorur acid fosforik ose hidroksid natriumi (NaOH).
5. Korrigjoni volumin
Sapo të arrihet pH e dëshiruar, sillni volumin e tamponit në 1 litër. Pastaj holluar tampon si dëshiruar. Ky tampon i njëjtë mund të jetë i holluar për të krijuar buffers prej 0.5 M, 0.1 M, 0.05 M ose ndonjë gjë në mes.
6. Këshilla për Buffer
Mos harroni se pKa nuk matet lehtë me një vlerë të saktë. Vlerat pak më të ndryshme mund të jenë të disponueshme në literaturë nga burime të ndryshme.
7. Çfarë keni nevojë
Për të bërë buffer, ju do të duhet tre substanca, ndërsa materialet e mbetura janë pajisje. Substancat janë fosfat monosodium, fosfat disodium, dhe acid fosforik ose hidroksid natriumi për të rregulluar pH.
Ju gjithashtu do të duhet një metër pH dhe hetim dhe laboratori i duhur. Këtu përfshihet një shishe volumetrike, cilindra të diplomuar, bërxolla dhe shiritat për trazim.
Së fundi, ju do të keni nevojë për një nxehtësi nxehtë.