Ky tampon përdoret për ndarjen e elektroforezës së ADN-së
Buffer TBE është veçanërisht i dobishëm për ndarjen e fragmenteve të vogla të ADN-së (MW <1000), të tilla si produkte të vogla të digestit të enzimeve të restrikcioneve .
TBE ka një kapacitet më të madh buffering dhe do të japë rezolutë më të mprehtë sesa tampon TAE . Buffer TAE është një zgjidhje e përbërë nga baza Tris, acid acetik dhe EDTA (Tris-acetate-EDTA).
TBE është në përgjithësi më e shtrenjtë se TAE dhe pengon ligazën e ADN-së, gjë që mund të shkaktojë probleme nëse ka për qëllim pastrimin e mëvonshëm të ADN-së dhe hapat e ligation. Me tre hapa të thjeshtë që vijojnë, mësoni se si të bëni buffer TBE. Nuk duhet të marrë më shumë se rreth 30 minuta për të krijuar këtë tampon. Ja se si:
Përgatitni një Solution Stock të EDTA
Një EDTA (etilenediamine tetraacetic acid) zgjidhje duhet të përgatitet përpara kohe. EDTA nuk do të shkojë plotësisht në zgjidhje derisa pH të përshtatet në rreth 8.0. Për një zgjidhje të aksioneve prej 500 mililitare të 0.5 M EDTA, peshoni 93.05 gram kripë dinatriumi EDTA (FW = 372.2). Pastaj shpërndajë atë në 400 ml ujë deionized dhe rregulloni pH me NaOH. Pas kësaj, plotësoni zgjidhjen në një vëllim përfundimtar prej 500 mililitra.
Përgatitni një Zgjidhje Stock të TBE
Bëni një solucion të përqendruar (5x) të TBE duke peshuar 54 g bazë Tris (FW = 121,14) dhe 27,5 g acid borik (FW = 61,83) dhe duke shpërndarë dy në rreth 900 mililitra të ujit deionizuar. Pastaj shtoni 20 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0) dhe rregulloni zgjidhjen në një volum përfundimtar prej 1 litër.
Kjo zgjidhje mund të ruhet në temperaturë dhome por një precipitim do të formohet në zgjidhje të vjetra. Magazinoni tamponen në shishe qelqi dhe hidhni nëse ka formuar një precipitim.
Përgatitni një Zgjidhje të Punës së TBE
Për elektroforezën agaroze të xehes, një tampon TBE mund të përdoret në një përqendrim prej 0.5x (përllogaritja 1:10 e stokut të koncentruar). Hollimi i zgjidhjes së aksioneve me 10x në ujë të deionit. Përqendrimet përfundimtare të solucionit janë 45 mM Tris-borate dhe 1 mM EDTA. Tampon tani është gati për përdorim në drejtimin e një xhel agaroze .
Çfarë keni nevojë
Për të bërë TBE tampon, do t'ju duhet vetëm katër substanca. Artikujt e mbetur në këtë listë janë pajisjet. Katër substancat e kërkuara janë kripë EDTA kripë, bazë Tris, acid borik dhe ujë deionized.
Sa i përket pajisjeve, do t'ju duhet një metër pH dhe standarde të kalibrimit, sipas rastit. Përveç kësaj, ju do të keni nevojë për 600 mililitra dhe 1500 mililitra të beakers ose flasks. Përfundimi i nevojave tuaja të pajisjes janë cilindra të diplomuar dhe trazohen bare dhe llokoçis pllakat.
Kontrolloni inventarin në laborator që do të përdorni për t'u siguruar që të keni gjithçka që ju nevojitet para se të filloni. Asgjë nuk është më e keqe sesa të ndalosh në mes të përgatitjes së një zgjidhjeje për shkak se ke dalë jashtë materialeve të duhura.
Nëse laboratori juaj është në shkollë ose në vendin tuaj të punës, kontrolloni me personelin e duhur për të parë se i kanë të gjitha sendet në stok. Të bësh kështu mund t'ju kursejë kohë dhe energji në fund.