Si të Bëni këtë Buffer Imunohistochemical errësirë
Fosfat i ftohur i kripur (PBS) është një zgjidhje tampon që zakonisht përdoret për imunohistokimik (IHC) dhe shpesh përdoret në kërkimet biologjike. PBS është një zgjidhje e kripës me bazë uji që përmban fosfat hidrogjeni natriumi, klorur natriumi dhe, në disa raste, klorid kaliumi dhe fosfat dihidrogjen kaliumi.
Njollë imunohistokimike
Imunohistokimi i referohet procesit të zbulimit të antigjeneve të tilla si proteinat në qelizat e një sekti të indeve duke përdorur parimin e antitrupave që lidhen posaçërisht me antigjenet në indet biologjike.
Ngjyrosja imunofluorescent ishte metoda e parë e bojës imunohistokemike.
Antigjenet bëhen të dukshme kur konjugohen me antitrupa duke përdorur ngjyra të fluorescencës për shkak të reagimit të lidhjes së antigjenit dhe antitrupave. Ky proces ndodh kur aktivizohet me anë të dritës emocionuese të një gjatësi vale specifike nën një mikroskop fluoreshent.
Përqendrimet e osmolariteti dhe joneve të zgjidhjeve përputhen me ato të trupit të njeriut - ato janë izotike.
Një recetë për PBS
Ju mund të përgatisni PBS në disa mënyra. Ka formula të shumta. Disa prej tyre nuk përmbajnë kalium, ndërsa të tjerë përmbajnë kalcium ose magnez .
Kjo recetë është relativisht e lehtë. Është për 10X PBS stock solution (0.1M). Megjithatë, ju gjithashtu mund të bëni një zgjidhje të aksioneve 1X, ose të filloni me këtë recetë 10X dhe holluar atë në 1X.
I gjithë procesi zgjat rreth 10 minuta.
Gjithashtu ofrohet një mundësi për të shtuar Tween.
Çfarë do t'ju nevojitet për të bërë PBS Buffer
- Fosfat natriumi monobasic (anhydrous)
- Fosfat natriumi dibazë (anhidrid)
- Klorid sodium
- Skalizoni dhe peshoni anije
- Ftohës magnetik dhe bar për llokoçis
- Një sondë pH e kalibruar dhe zgjidhje të përshtatshme për rregullimin e pH
- 1L volumetrike balonë
- Tween 20 (opsional)
Si për të bërë saline fosforik buferet (PBS)
Peshoni 10.9g fosfat natriumi anhydrous dibasic (Na2HPO4), 3.2g fosfat natriumi anhydrous monobasic (NaH2PO4), dhe 90g klorur natriumi (NaCl).
Shkrihet në vetëm nën 1L ujë të distiluar.
Rregulloni pH në 7.4 dhe zgjidhni deri në një volum përfundimtar prej 1L.
Holloni 10X para përdorimit dhe rregulloni pH nëse është e nevojshme.
Ju mund të bëni një zgjidhje PBS që përmban 0.5% Tween 20 duke shtuar 5mL Tween 20 në zgjidhjen 1L.
Këshilla për të bërë PBS Buffer
Mbajeni tampon në temperaturën e dhomës pasi të keni bërë zgjidhjen PBS.
Reagentët jo anhidë mund të zëvendësohen, por do të duhet të rillogaritni masën e duhur të secilit për të akomoduar molekulat e ujit të shtuar.
Përdorimet e salinës së fosfateve të buferuara (PBS)
Kripërat fosfatike të buta përdor shumë për shkak se është izotik dhe jo toksik për shumicën e qelizave. Mund të përdoret për të holluar substancat dhe shpesh përdoret për shpëlarjen e kontejnerëve të qelizave. PBS mund të përdoret si një hollues në metoda të ndryshme të biomolekulave të thata, sepse molekulat e ujit brenda saj do të strukturohen rreth substancës-proteina, për shembull. Do të "thahen" dhe do të mbahen në një sipërfaqe të fortë.
PH mbetet e qëndrueshme dhe e qëndrueshme për të parandaluar shkatërrimin e qelizave.
Filmi i hollë i ujit që lidhet me substancën parandalon denaturimin ose ndryshimet e tjera konformacionale. Mbështetësit e karbonit mund të përdoren për të njëjtin qëllim, por me më pak efektivitet.
PBS mund të përdoret gjithashtu për të marrë një spektër referimi kur matet adsorpimi i proteinës në elipsometry.