Gjithashtu i referuar si analiza RFLP, kjo teknikë shfrytëzon polimorfizmat në kodet gjenetike të individëve. Edhe pse të gjithë anëtarët e një specie kanë në thelb të njëjtin përbërje gjenetike, këto dallime të lehta përbëjnë variacionet në fenotip, si pamja apo metabolizmi, midis individëve.
RFLP: Teknika e Analizës dhe Aplikacionet
Teknika e analizës RFLP përfshin prerjen e një rajoni të veçantë të ADN-së me ndryshueshmëri të njohur, me enzima kufizuese, pastaj ndarjen e fragmenteve të ADN-së me elektroforezën agaroze të xehes dhe përcaktimin e numrit të fragmenteve dhe madhësive relative.
Një enzimë e kufizimit është një enzimë, një molekulë proteine, e cila ul ADN-në në vendet e kufizimit. Në thelb, mostra e ADN-së ndahet dhe tretet nga enzimat e restrikcioneve. Fragmentet rezultuese ndahen sipas gjatësisë së tyre dhe modeli i madhësive të fragmenteve do të ndryshojë për secilin individ të testuar.
Procesi i plotë RFLP kërkon etiketimin e hetimit, fragmentimin e ADN-së, elektroforezën, fshirjen, hibridizimin, larjen dhe autoradiografinë. RFLP zbulohet duke përdorur filmin me rreze X në një autoradiografi, ku fragmentet e ADN-së mund të shihen dhe të analizohen pasi ato të jenë të ndara nga njëra tjetra nga elektroforeza.
Disa nga aplikimet për analizën e RFLP përfshijnë:
- Gjurmët e gishtave të ADN Shkencëtarët mjeko-ligjorë mund të përdorin analizën e RFLP për të identifikuar të dyshuarit bazuar në mostrat e provave të grumbulluara në skenat e krimeve.
- Atësisë. RFLP përdoret gjithashtu për përcaktimin e atësisë ose për gjetjen e prejardhjes.
- Diversiteti gjenetik. Teknika mund të përdoret në studimin e evolucionit dhe migrimit të kafshëve të egra, duke studiuar modelet e mbarështimit në popullatën e kafshëve dhe në zbulimin dhe diagnozën e sëmundjeve të caktuara.
Teknika e përdorimit të zbulimit RFLP të variacionit në gjenoma është një mjet jetik në hartimin e gjenomit dhe analizën e sëmundjeve gjenetike. Nëse lokacioni i një gjeneti të veçantë të sëmundjes është duke u kërkuar në një kromozom të caktuar, atëherë hulumtuesit do të analizojnë ADN-në e anëtarëve të një familjeje me sëmundjen, pastaj do të kërkojnë modelet e ngjashme të trashëgimisë në alela RFLP.
Pasi një gjen sëmundje është lokalizuar, kryerja e analizës RFLP ndaj anëtarëve të tjerë të familjes mund të zbulojë një bartës të gjeneve mutante ose sinjalizojnë rrezikun e përgjithshëm të sëmundjes. Është e rëndësishme të theksohet se teknika RFLP nuk është përdorur gjerësisht tani që teknikat më të reja dhe më të fuqishme përdoren për analizën e ADN-së në shkencat e mjekësisë ligjore dhe në disa fusha të tjera.
Aspekti negativ i analizës
Për fat të keq, teknikat e analizës RFLP janë të lodhshme dhe të ngadalta. Përveçse kërkon një sasi të madhe të ADN-së së mostrës - mostër zakonisht duhet të jetë rreth madhësisë së një të katërtës, e cila është relativisht e madhe për mostrat e ADN-së - procesi, nga etiketimi i provës deri te larja dhe autoradiografia, mund të shkojë deri në një muaj të plotë për të përfunduar.
Rezultatet nga Projekti i Gjenomit Njerëzor kanë zëvendësuar mjaftueshëm nevojën për RFLP. Projekti lejonte përcaktimin e sekuencës së tërë të ADN-së që gjendet në qelizat e njeriut, gjenomit njerëzor, dhe për identifikimin e të gjitha gjeneve në gjenomën njerëzore.