Si dalin këto endonuceleases
Sa dini për enzimat e kufizimit? Merrni një kuptim më të mirë se çfarë bëjnë ata dhe pse ata janë të rëndësishëm, me këtë rishikim.
Përcaktimi i Enzymëve të Kufizimit
Endonukleaza kufizuese janë një klasë e enzimë që prenë molekulat e ADN-së. Çdo enzimë njeh një sekuencë unike të nukleotideve në fidanëzën e ADN-së. Sekuenca të tilla janë zakonisht rreth 4 deri në 6 baza të gjatë të gjatë. Sekuencat janë palindromike në atë që fidanëzimi komplementar i ADN-së ka të njëjtin sekuencë vetëm në drejtimin e kundërt.
Me fjalë të tjera, të dy fijet e ADN-së priten në të njëjtin vend.
Ku gjenden këto enzima
Enzimat e restrikcioneve gjenden në shumë lloje të ndryshme të baktereve ku roli i tyre biologjik është që të marrin pjesë në mbrojtjen e qelizave. Këto enzime "kufizojnë" ADN-në e huaj (p.sh. virale) që hyn në qelizë, duke e shkatërruar atë. Qeliza pritëse ka një sistem të modifikimit të kufizimit që metilizon ADN-në e vet në vendet specifike për enzimat e tij përkatëse të kufizimit, duke e mbrojtur atë nga copëzimi. Janë zbuluar më shumë se 800 enzima të njohura që njohin më shumë se 100 sekuenca nukleotide të ndryshme.
Përdorimi në Bioteknologji
Enzimat e kufizimit përdoren në bioteknologji për të prerë ADN-në në fije më të vogla në mënyrë që të studiojnë ndryshimet në gjatësinë e fragmenteve ndërmjet individëve (Fragment Length Polymorphism Length - RFLP). Ata përdoren gjithashtu për klonimin e gjeneve.
Teknikat RFLP janë përdorur për të përcaktuar që individët ose grupet e individëve kanë dallime dalluese në sekuencat e gjeneve dhe modelet e ndarjes së kufizimit në zona të caktuara të gjenomit.
Njohja e këtyre zonave unike është baza për gjurmimin e gishtërinjve të ADN-së . Secila prej këtyre metodave varet nga përdorimi i elektroforezës së agarozës së xehes për ndarjen e fragmenteve të ADN-së. TBE tampon, i cili është i përbërë nga baza Tris, acid borik dhe EDTA, përdoret zakonisht për elektroforezën e agarozës së geleve për të ekzaminuar produktet e ADN-së.
Llojet e Enzymave të Kufizimit
Ekzistojnë tri lloje të ndryshme të enzimeve të kufizimit. Lloji I zvogëlon ADN-në në vende të rastësishme deri në 1000 ose më shumë palë bazë nga vendi i njohjes. Lloji III shkurton në afërsisht 25 çifte bazë nga vendi. Llojet I dhe III kërkojnë ATP dhe mund të jenë enzima të mëdha me nën-njësi të shumta. Enzimat e tipit II, të cilat kryesisht përdoren në bioteknologji, prenë ADN-në brenda sekuencës së njohur pa patur nevojë për ATP dhe janë më të vogla dhe më të thjeshta.
Enzimat e kufizimit të tipit II janë emëruar sipas specieve bakteriale nga të cilat ato janë të izoluara. Për shembull, enzimi EcoRI u izolua nga E. coli . Shumica e publikut është e njohur me shpërthimet E. coli në ushqim.
Enzimat e kufizimit të tipit II mund të gjenerojnë dy lloje të ndryshme të prerjeve në varësi të faktit nëse ata prenë të dy fijet në qendër të sekuencës së njohjes ose secilës fije floku afër një fundi të sekuencës së njohjes.
Prerja e mëparshme do të gjenerojë "mbaresa të hapura" pa mbingarkesë nukleotide. Ky i fundit gjeneron skajet "ngjitëse" ose "kohezive", sepse secili fragment rezultues i ADN-së ka një shtrirje që komplimenton fragmente të tjera. Të dyja janë të dobishme në gjenetikë molekulare për të bërë ADN-në dhe proteinat rekombinante .
Kjo formë e ADN-së dallon sepse është prodhuar nga lidhja (lidhja së bashku) e dy ose më shumë fijeve të ndryshme që fillimisht nuk ishin të lidhura së bashku.