Zhvilluar në vitin 1983, procesi i PCR ka bërë të mundur kryerjen e sekuencimit të ADN-së dhe identifikimin e rendit të nukleotideve në gjenet individuale.
Metoda përdor çiklizëm termik ose ngrohje dhe ftohje të përsëritur të reagimit për shkrirjen dhe replikimin e ADN-së. Ndërsa PCR vazhdon, ADN "i ri" përdoret si një shabllon për replikim dhe një reaksion zinxhir fillon, duke amplifikuar në mënyrë eksponenciale modelin e ADN-së.
Teknikat e PCR aplikohen në shumë fusha të bioteknologjisë, duke përfshirë inxhinierinë e proteinave , klonimin, forenzikën (gjurmimin e gishtave të ADN-së), testimin e atësisë, diagnozën e sëmundjeve trashëgimore dhe / ose infektive dhe për analizën e mostrave mjedisore.
Në forenzikë, në veçanti, PCR është veçanërisht e dobishme sepse amplifikon edhe sasinë më të vogël të evidencës së ADN-së. PCR gjithashtu mund të përdoret për të analizuar ADN-në që është mijëra vjeç dhe këto teknika janë përdorur për të identifikuar çdo gjë nga një mamuth 800,000 vjeçar për mumiet nga e gjithë bota.
Procedura PCR është si vijon:
- Inicijimi: Ky hap është i nevojshëm vetëm për polimerazat e ADN-së që kërkojnë PCR të nxehta. Reaksioni nxehet në mes 94 dhe 96 ° C dhe mbahet për 1-9 minuta.
- Denaturimi: Nëse procedura nuk kërkon inicializim, denaturacioni është hapi i parë. Reaksioni nxehet në 94-98 ° C për 20-30 sekonda. Bono hidrogjeni i templantit të ADN-së ndërpriten dhe krijohen molekulat e ADN-së me një brez.
- Pjekja: Temperatura e reaksionit është më e ulët në mes 50 dhe 65 ° C dhe mbahen për 20-40 sekonda. Primerët përputhen me templatin e ADN-së të bllokuar. Temperatura është jashtëzakonisht e rëndësishme gjatë këtij hapi. Nëse është shumë e nxehtë, abetarja nuk mund të lidhet. Nëse është shumë e ftohtë, abetarja mund të lidhet papërsosmërisht. Një lidhje e mirë formohet kur sekuenca e abetarit përputhet me rendin e shabllonit.
- Shtrirja / zgjatja: Temperatura gjatë këtij hapi ndryshon në varësi të llojit të polimerazës. Polimeraza e ADN-së sintetizon një fillesë krejtësisht të re të ADN-së.
- Zgjatimi përfundimtar: Ky hap kryhet në 70-74 ° C për 5-15 minuta pas ciklit përfundimtar të PCR.
- Mbajtja përfundimtare: Ky hap është opsional. Temperatura mbahet në 4-15 ° C dhe ndriçon reagimin.
Procedura ndahet në tri faza:
- Përforcim eksponencial: Gjatë çdo cikël, produkti (pjesa specifike e ADN-së që përsëritet) është dyfishuar.
- Faza e nivelimit: Pasi ADN polimeraza humbet aktivitetin dhe konsumon reagentët, reagimi ngadalësohet.
- Pllajë: Nuk grumbullohen më shumë produkte.