Si të Freeze-Dry një Kulturë Bakteriale (Lyophilization)

Liofilizimi, ose ngrirja e tharjes, është një procedurë e shkurtër laboratorike

Tharje me ngrirje, e quajtur edhe liofilizim ose kriodifikim, është procesi i heqjes së ujit nga një produkt pasi të jetë ngrirë (dhe pastaj të vendoset nën një vakum) duke lejuar që akulli të ndryshojë nga një lëndë e fortë në një avull, pa kaluar nëpër një fazë të lëngshme. Akulli (ose tretës të tjerë të ngrirë) hiqen nga një produkt përmes procesit të sublimimit dhe molekulat e ujit të lidhura janë hequr nëpërmjet procesit të desorpcionit.

Bazat e Liofilizimit

Një nga mënyrat më të mira për të ruajtur një kulturë bakteriale, kërpudhore, maja ose mikroorganizëm tjetër për periudha të gjata kohore është përdorimi i procesit të tharjes së ngrirjes. Kjo procedurë e shkurtër laboratorike mund të ndërmerret me çdo ngrirëse-tharëse në dispozicion në treg që do të ruajë koleksionin tuaj të kulturës. Për shkak se liofilizimi është forma më komplekse dhe më e shtrenjtë e tharjes, procesi zakonisht kufizohet në materiale delikate, të ndjeshme ndaj nxehtësisë me vlerë të lartë. Substancat që nuk janë të dëmtuara nga ngrirja zakonisht mund të lyofilizohen në mënyrë që magazinimi në frigorifer të jetë i panevojshëm.

Ky proces mund të zgjasë deri në tre orë dhe për 24 orë, duke mos përfshirë kohën e rritjes së kulturës.

Procesi hap pas hapi i liofilizimit

1. Së pari, rriteni një kulturë brenda natës, ose lëndinë, të mikroorganizmave në LB ose pjatë tjetër të përshtatshme agar ushqyese.

2. Tjetra, përgatitini shishta sterile me kapak të krehur me autoklavim para kohe, me kapuçat (gome ndalues) të vendosura lirshëm në krye. Vendosni etiketat e letrës të shtypura me identifikimin e kulturës brenda tubave para autoklavimit. Përndryshe, përdorni tuba me kapakë të projektuar për sterilitet .

1. Shto tampon liofilizimi 4 mL në pjatë. Nëse është e nevojshme, qelizat mund të pezullohen duke përdorur një shufër qelqi steril.

2. Shpejt transferoni pezullimin e kulturës në shishat e sterilizuara. Shtoni afërsisht 1,5 ml për shishkë. Mbyllni me kapakun e gomës.

3. Freeze pezullimin e kulturës brenda shisheve duke vendosur shishet në një freezer -20 gradë Celsius.

1. Sapo kulturat të jenë të ngrira, përgatiteni tharësin e ngrirjes duke e kthyer atë dhe duke lejuar kohën që kushtet e duhura të temperaturës dhe vakumit të stabilizohen. Bëni këtë sipas udhëzimeve të prodhuesit për markën e veçantë të tharëses së ftohtë që po përdorni.

2. Kujdes dhe aseptik, vendosni kapakët e shishkës lirisht në majë të shisheve, në mënyrë që lagështia të mund të shpëtojë gjatë procesit të tharjes së ngrirjes dhe vendosni shishkat në një dhomë ngrirëse-tharëse. Aplikoni vakumin në dhomën sipas udhëzimeve të prodhuesit.

3. Lejo kohen e kultures per te liofilizuar krejtesisht (thate). Kjo mund të marrë nga disa orë në natë varësisht nga vëllimi i secilit mostër dhe sa mostra keni.

4. Hiqni mostrat nga dhoma e ngrirësit-tharjes sipas udhëzimeve të prodhuesit dhe menjëherë vulosni shishet me kapakë prej gome, pastaj në krye të grimcave.

5. Magazinoni koleksionin e kulturës së liofilizuar në temperaturën e dhomës.

Produkte që do t'ju nevojiten

• Ngrirje-tharëse
• Ushqyes ose pjata të tjera të përshtatshme agar (dhe inkubator për kultivimin e kulturës)
• Shufra qelqi
• Tampon Lyophilization
• Shishes me vrima me kërma me mbërthyes gome (dhe një crimper për të aplikuar kapakët)
• frigorifer

<sub>Referenca:

PS shkencore. Parimet themelore të tharjes së ngrirjes. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>