Çfarë Vektorët kanë të bëjnë me gjenet dhe klonimin
Në klonimin molekular, vektori është një molekulë ADN që shërben si bartës për transferimin ose futjen e gjeneve të huaj në një qelizë tjetër, ku mund të përsëritet dhe / ose shprehet. Vektorët janë ndër mjetet thelbësore për klonimin e gjeneve dhe janë më të dobishme nëse ato gjithashtu kodojnë një lloj markeri shënues që kodon një molekulë bioindikatore që mund të matet në një vlerësim biologjik për të siguruar futjen dhe shprehjen e tyre në organizmin pritës.
Në mënyrë të veçantë, një vektor i klonimit është ADN i marrë nga një virus, plasmid ose qeliza (të organizmave më të lartë) që duhet futur me një fragment të ADN-së të huaj për qëllime klonimi. Meqenëse vektori i klonimit mund të mbahet stabilisht në një organizëm, vektori gjithashtu përmban karakteristika që lejojnë futjen ose heqjen e ADN-së. Pasi të jetë klonuar në një vektor klonimi, fragmenti i ADN-së mund të nën klonuar më tej në një vektor tjetër që mund të përdoret edhe me më shumë specifikë.
Në disa raste, viruset përdoren për të infektuar bakteret. Këto viruse quhen bakterofagë, ose fag, për të shkurtër. Retroviruset janë vektorë të shkëlqyeshëm për futjen e gjeneve në qelizat e kafshëve. Plasmidet, të cilat janë copa rrethore të ADN-së, janë vektorët më të përdorur për futjen e ADN-së së huaj në qeliza bakteriale. Ata shpesh mbajnë gjenet e rezistencës antibiotike që mund të përdoren për të testuar për shfaqjen e ADN plazmidit, në pllakat antibiotike petri.
Transferimi i gjeneve në qelizat bimore kryhet zakonisht duke përdorur bakterin Agrobacterium tumefaciens , i cili vepron si një vektor dhe fut një plasmid të madh në qelizën pritëse. Vetëm ato qeliza që përmbajnë vektorin e klonimit do të rriten kur të jenë të pranishëm antibiotikët.
Llojet kryesore të vektorëve të klonimit
Gjashtë llojet kryesore të vektorëve janë:
- Plasmid. ADN ekstrakromosomale rrethore që përsëritet autonomisht brenda qelizës bakteriale. Plazmidet në përgjithësi kanë një numër të lartë kopjeje, të tilla si pUC19 që ka një numër kopje prej 500-700 kopje për qelizë.
- Fagut. Molekulat lineare të ADN-së rrjedhin nga bakteriofagia lambda. Mund të zëvendësohet me ADN-në e huaj pa ndërprerë ciklin e tij të jetës.
- Kozmide. Një tjetër molekulë ADN-së rrethore që kombinon tiparet e plazmideve dhe fagut.
- Kromozomet Artificiale Bakteriale. Bazuar në plazmidet bakteriale mini-F.
- Kromozomet Artificiale të Qumështit. Ky është një kromozom artificiale që përmban telomerat (mbulesat e disponueshme në skajet e kromozomeve të cilat janë prerë gjatë ndarjes së qelizave) me origjinën e replikimit, një centromere maja (pjesë e një kromozomi që lidhë kromatidat motër ose një dyad) dhe një marker selektiv për identifikim në qelizat maja.
Kromozomi artificial artificial. Ky lloj i vektorit është potencialisht i dobishëm për shpërndarjen e gjeneve në qelizat e njeriut, dhe një mjet për studime të shprehjes dhe përcaktimin e funksionit kromozomor të njeriut. Ajo mund të mbajë fragment shumë të madh të ADN-së.
Të gjithë vektorët e projektuar kanë origjinën e replikimit (një riprodhues), një vend klonimi (i vendosur aty ku futja e ADN-së së huaj ose nuk prish replikimin ose inaktivimin e shënuesve esencial) dhe një marker selektiv (zakonisht një gjen që siguron rezistencë ndaj një antibiotiku).